透明細(xì)胞癌(clearcellrenalcellcarcinoma，CCRCC)是腎臟惡性腫瘤的一種常見的類型，其占全身惡性腫瘤的2%-3%，miRNA(microRNA)是一類具有調(diào)控基因表達(dá)功能的小分子,新近的臨床研究表明大量miRNA能有效抑制腫瘤或者促使腫瘤發(fā)生和發(fā)展的潛能。這預(yù)示著研究miRNA信使分子能在人類腫瘤診斷治療中發(fā)揮重要的作用，為了深入認(rèn)識(shí)腎透明細(xì)胞癌起源的具體的發(fā)病機(jī)制，本文研究了miRNA在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)調(diào)控情況，從而進(jìn)一步探討miR-143和miR-1256在腎透明細(xì)胞癌中的調(diào)控表達(dá)作用。
1資料與方法
1.1一般資料
收集我院自2003年1月至2010年10月期間的36例原發(fā)性散發(fā)腎透明細(xì)胞癌的手術(shù)時(shí)切除的標(biāo)本，其中男患者20例，女16例，年齡都在31-80歲，平均年齡在55.6歲。左側(cè)24例例，右側(cè)12例。所有腫瘤標(biāo)本都經(jīng)過組織病理學(xué)證實(shí)確實(shí)為腎透明細(xì)胞癌。所有病例在手術(shù)前都未作任何放療、化療治療。對(duì)照標(biāo)本則由36例遠(yuǎn)離腫瘤的癌周圍的腎臟組織。
1.2組織的提取
取腎透明細(xì)胞癌組織和正常腎組織標(biāo)本采用Trizol法進(jìn)行提取組織總剛A，通過異丙醇沉淀濃縮以及分光光度計(jì)測(cè)定濃度、瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的質(zhì)量問。將提取的總RNA標(biāo)本進(jìn)行miRNA表達(dá)譜芯片分析。
1.3Real-timePCR分析
cDNA合成以lOng總的RNA為轉(zhuǎn)錄模板使用miR143和miR-1256特異性逆轉(zhuǎn)錄引物使其發(fā)生逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)條件為16°C，30min和42°C，30min、85°C，5min，采用SYBRGreen法進(jìn)行試劑熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次確定CT值。
1.2方法
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
本次研究所得數(shù)據(jù)采用SPSSl1.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要采用NOVA檢驗(yàn)，以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
miRNA表達(dá)譜芯片、NorthenblotReal-timeCR法進(jìn)行檢查，研究結(jié)果提示miR-143和miR-1256兩基因在腎透明細(xì)胞癌中較正常的腎細(xì)胞組織相比知在腎透明細(xì)胞癌中明顯低表達(dá)。miRNA表達(dá)譜芯片顯示miR-143和miR-1256在腎透明細(xì)胞癌組織中比正常腎細(xì)胞組織表達(dá)低很多，二者表達(dá)差異的倍數(shù)分別是13.9和16.1倍。而Real-timePCR法顯示miR-143在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)為(16.01土8.90)相比正常的腎細(xì)胞組織317.79±124.65這一數(shù)據(jù)明顯低很多，二者表達(dá)差異具有顯著性差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，miR-1256在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)數(shù)據(jù)為(1.29士0.83)較正常腎細(xì)胞組織(8到士5.81)也低很多，同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。
3討論
3.1腎透明細(xì)胞癌(clearcellrenalcellcarcinoma，CCRCC)是腎臟惡性腫瘤的一種常見的類型，其占全身惡性腫瘤的2%-3%。miRNA是指一個(gè)短的核糖核酸(RNA)分子。一般在真核細(xì)胞中一個(gè)microRNA分子和其他分子RNA相比，核昔酸數(shù)較少(平均22)。m剛A作用是綁定到目標(biāo)信使剛A轉(zhuǎn)錄(mRNA的)上的互補(bǔ)序列的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)，通常在翻譯抑制或目標(biāo)退化和基因沉默
3.2結(jié)果分析
本次研究結(jié)果顯示miRNA表達(dá)譜芯片、NorthenblotReal-timeCR法進(jìn)行檢查，研究結(jié)果提示miR-143和miR-1256兩基因在腎透明細(xì)胞癌中較正常的腎細(xì)胞組織相比知在腎透明細(xì)胞癌中明顯低表達(dá).miRNA表達(dá)譜芯片顯示miR-143和miR-1256在腎透明細(xì)胞癌組織中比正常腎細(xì)胞組織表達(dá)低很多，二者表達(dá)差異的倍數(shù)分別是13.9和16.1倍。而Real-timePCR法顯示miR-143在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)為(16.01士8.90)相比正常的腎細(xì)胞組織(317.79土124.65)這一數(shù)據(jù)明顯低很多，二者表達(dá)差異具有顯著性差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P<0.05)，miR-1256在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)數(shù)據(jù)為(1.29士0.83)較正常腎細(xì)胞組織(8.95±5.81)也低很多，同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。
顯然本研究通過多種檢測(cè)方法都證實(shí)了miR-143miR-1256在腎透明細(xì)胞癌組織中明顯下調(diào)表達(dá)且它們的低表達(dá)可能在不同臨床腫瘤分期、分級(jí)中并無顯著性差異。miR-143和miR-1256基因在腫瘤細(xì)胞中的下調(diào)表達(dá)是否與腫瘤的其它臨床病理有關(guān)以及它們能否作為小分子陽A藥物治療腎透明細(xì)胞癌是我們后續(xù)研究的重點(diǎn)。
3.3結(jié)論
綜上所述，miR-1256和miRI43基因的表達(dá)情況研究能對(duì)腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展有重要臨床指導(dǎo)意義
